百迪成脂誘導分化+染色試劑盒Kit
- 品名： 百迪成脂誘導分化+染色試劑盒Kit
- 型號： S1023-KIT
- 產(chǎn)品詳情
- 規(guī)格參數(shù)
產(chǎn)品信息
| 適用范圍 | 試劑 |
|---|---|
| 使用方法 | 1. 試劑配制： 完全誘導培養(yǎng)基B：2-8℃過夜融化成脂誘導添加物B，使用前須37℃復溫30分鐘至內(nèi)容 物充分解凍為透明無沉淀。將人間充質(zhì)干細胞成脂誘導基礎培養(yǎng)基平均分成2份，各 45ml，加入成脂誘導添加物B配制成完全誘導培養(yǎng)基B，充分混勻。 完全誘導培養(yǎng)基C：2-8℃過夜融化成脂誘導添加物C，加入人間充質(zhì)干細胞成脂誘導基 礎培養(yǎng)基的另一份45 ml，配制成完全誘導培養(yǎng)基C，充分混勻，2-8 ℃保存。 油紅O染液（工作液）：取油紅O儲液，與蒸餾水以3：2的比例混合均勻，中性濾紙過 濾，即配制成了油紅O染液（工作液），油紅O染色工作液現(xiàn)配現(xiàn)用。 2. 培養(yǎng)皿處理：加適量室溫復溫的包被溶液到培養(yǎng)器皿中，輕輕搖動使其覆蓋整個培養(yǎng)器 皿底面，室溫靜置30-60分鐘。棄去溶液，室溫晾干。 3. 準備所需誘導分化的MSC，當細胞融合達85%左右時，用消化液消化細胞，并用MSC完 全培養(yǎng)基重懸。 4. 按照3×104 cells/cm2的密度將細胞接種于已包被處理的六孔板中，每孔MSC完全培養(yǎng)基 （需自備）2 ml，37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)（細胞密度可根據(jù)實驗室情況進行調(diào)整）。 5. 當細胞融合達90%時，棄去培養(yǎng)上清，每孔添加完全誘導培養(yǎng)基B 2 ml/孔，37℃，5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。 6. 誘導培養(yǎng)72小時后棄去原培養(yǎng)上清，添加完全誘導培養(yǎng)基C 2 ml/孔，37℃、5%CO2培 養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。 7. 繼續(xù)誘導培養(yǎng)24小時后棄去原培養(yǎng)基，添加完全誘導培養(yǎng)基B 2 ml/孔，37℃、5%CO2 培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。 8. 重復步驟6、7約3-5次，待細胞內(nèi)出現(xiàn)明顯脂滴時更換為完全誘導培養(yǎng)基C繼續(xù)培養(yǎng)（一 般骨髓間充質(zhì)干細胞在培養(yǎng)4天左右高倍鏡下能看到細胞漿內(nèi)有較多數(shù)量的圓形亮泡，5- 9天融合為較大的亮泡，這些結構圍繞在細胞核周圍，較大的與細胞核大小相當。狀態(tài)較 好的細胞10天內(nèi)可結束培養(yǎng)過程，若10天后仍未見脂滴結構，請注意分析操作步驟與其 他原因。臍帶等組織來源的細胞時間可能不同，需根據(jù)具體情況判斷）。 9. 每2天更換新鮮完全誘導培養(yǎng)基C，繼續(xù)培養(yǎng)至脂滴足夠大時培養(yǎng)結束（根據(jù)實驗需要選 擇培養(yǎng)結束時間，若成脂面積過大或脂滴過大導致連成片則不利于結果的呈現(xiàn)，建議提 前終止。誘導終止時間以脂滴大小或擬定的對照時間為準，一般最長不超過40天）。 10. 誘導培養(yǎng)結束時，棄去培養(yǎng)上清，DPBS洗細胞兩次，4%中性多聚甲醛溶液2ml/孔室溫 固定細胞20分鐘（培養(yǎng)結束時或中途也可以選擇其他檢測方法，如基因表達檢測等）。 11. 棄去固定液，DPBS洗2次，加入油紅O染液（工作液）1ml/孔染色15分鐘。該步驟適用 于鑒定成脂能力，若出現(xiàn)脂滴（脂肪細胞）則會呈現(xiàn)紅色著色。染色時間需實際情況確 定。 12. 棄去油紅O染液（工作液），DPBS洗3次，添加新鮮DPBS。 13. 顯微鏡下觀察并拍照。 14. 結果判定：按照程序操作完畢，低倍鏡下觀察可見大面積紅色著色點，20倍和40倍鏡下 可觀察到紅色球形在細胞內(nèi)的情況，此紅色著色球為脂滴，說明實驗所用的MSC具有成 脂能力。否則，所使用的MSC無成脂能力。 |
| 注意事項 | 1. 成脂誘導后細胞易脫壁，換液時完全培養(yǎng)基必須經(jīng)室溫復溫 30 分鐘。添加培養(yǎng)基時動作 要輕柔，沿培養(yǎng)器皿側壁緩緩加入，避免吹起細胞。 2. 細胞起始誘導時，融合度對誘導效果十分關鍵，必須確保細胞生長至足夠密時再進行誘 導。 3. 換液時誘導液必須經(jīng)過復溫，否則影響誘導效果和可能導致細胞脫壁。 4. 染色工作液現(xiàn)配現(xiàn)用。 5. 染色過程中一定要避免組織細胞被風干，風干會影響顯微觀察效果。 6. 如果試劑外包裝管出現(xiàn)裂縫，應立即停止使用。 7. 應嚴格按照貯存要求貯存，避免反復凍融。 8. 操作過程應在無菌環(huán)境下進行，必須保證操作過程中使用的所有容器及所有直接接觸細 胞液的器具嚴格無菌。 |
| 聲明 | 僅用于科研使用，不能用于臨床診斷和治療。 |
| 保存條件 |
產(chǎn)品詳情
間充質(zhì)干細胞（MSC）具有多向分化的潛能，在一定條件下可以體外誘導分化為脂肪細胞、 成骨細胞、成軟骨細胞，是 MSC 鑒定的必檢項目，在多種組織來源和制作方法的 MSC 藥品 質(zhì)量控制中，成骨、成脂、成軟骨也是必檢指標。BDBIO 成脂誘導分化染色試劑盒可用于鑒 定人 MSC 是否具有成脂分化能力，滿足 MSC 質(zhì)量控制的要求，此外培養(yǎng)基還可用于研究誘 導分化過程中的其他檢測，如 mRNA 檢測、lncRNA 檢測、microRNA 檢測、蛋白表達檢測、 油脂定量檢測、免疫組化檢測等。本產(chǎn)品誘導 MSC 分化為的脂肪細胞多為多泡脂肪細胞樣， 當脂肪滴融合過大時容易脫壁，難見單泡脂肪細胞樣，用于脂肪研究可斟酌使用本產(chǎn)品。
暫無內(nèi)容...
